Ejemplo de Terapia Epigenómica

Terapia Epigenómica en el Linfoma 

Tema: Terapias emergentes de modulación epigenética en el linfoma

Mecanismo Epigenómico tratado: acetilación de histonas

Como se lo hizo:

Mediante la inhibición de HDAC usando fármacos como:

• Varinostat que inhibe tanto a las HADC de clase 1 y 2.
• Abexinostat y Quisinostat (inhibidores de HDAC de amplio espectro), mocetinostat y entinostat (los cuales inhiben HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC11) y chidamida (que inhibe HDAC1, HDAC2). 

Resultados:

• El tratamiento con inhibidores de HDAC se asocia frecuentemente con trombocitopenia, fatiga y toxicidad gastrointestinal que dependen del agente específico.
• Tienen una respuesta objetiva de 50%, y una mediana de supervivencia libre de progresión (SLP) de 30,5 meses.
• Acetilan proteínas tanto histonas como no histonas que están implicadas en varios procesos biológicos, incluido el ciclo celular, respuesta al daño del ADN, apoptosis, angiogénesis, y regulación de la inmunología tumoral.

Referencias

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6650343/

Técnica de edición de Ácidos Nucleicos

 Técnicas de edición de ácidos nucleicos en el Linfoma 

Tipo de Edición: in vivo de células somáticas

Dirigido hacia: RNA (sgRNA)/ genes Sp3 y Phip

Dirigido por:  CRISPR / Cas9 

Vector:   retroviral pQCiG2 sgRNA / Cas9

Célula a tratar: Células B

Vía de administración: vía intravenosa

Resultados:

Corto plazo: los tumores obtenidos generados por el direccionamiento CRISPR / Cas9 de Sp3 y Phip indicó reducciones significativas en los niveles de ambas proteínas en todos los tumores analizados.

Mediano plazo: sgRNA funcional dirigido a un gen supresor de tumores podría enriquecerse de forma reproducible a partir de grupos que contienen 5 sgRNA diferentes.

Largo plazo: podría representar una estrategia más universal para mejorar los efectos antitumorales de las células B.

Referencias:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5159885/

Un ejemplo de Terapia Regenerativa o Terapia Celular o Terapia con Stem Cells

TERAPIA CON STEM CELLS EN EL LINFOMA 

Tipo de stem cell: células madre hematopoyéticas.(HSC) (somáticas)

Método de obtención: 

1. Estimulación medular con el uso de factores de crecimiento para aumentar la cantidad de células madre hematopoyéticas en la sangre periférica.
2. Recolección y filtración de células mediante equipo de aféresis  para ser sometidas a criopreservación.

Vía de administración: Infusión intravenosa 

Resultados: 

• A corto plazo corre el riesgo de desarrollar infecciones hasta que se incorporen correctamente las células madre.
• A mediano plazo los pacientes que no tuvieron tratamiento previo con rituximab volvieron a recaer y aumentaron su probabilidad de muerte.
• A largo plazo los pacientes que tuvieron tratamiento previo con rituximab mejoraron la supervivencia de los pacientes con linfoma folicular ya que demuestran una tasa relativamente baja de toxicidades tardías y neoplasias malignas secundarias.

Referencias: 

1. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1083879117304688#bib0045 

Un ejemplo de transgénico animal o vegetal para la enfermedad escogida, e indicar 5 ventajas y 5 desventajas de los transgénicos

 Transgénico animal en el Linfoma 

Tema: IBTK contribuye a la linfomagénesis de células B en ratones transgénicos Eμ-myc confiriendo resistencia a la apoptosis. (1)

Tipo de animal transgénico: Ratones transgénicos Eμ-myc (knock-out). (1)

Método: La eliminación del gen Ibtk murino se obtuvo utilizando la línea de células madre embrionarias (ES) XF224, que lleva el vector de trampa genética pGT2Lxf. El clon XF224 ES se microinyectó en el blastocistos C57BL / 6 J, para producir ratones Ibtk - / - homocigotos. (1)

Uso: Determinar la contribución de Ibtk a la linfomagénesis de células B inducida por Myc. Además verificar que la perdida de Ibtk retrasa la aparición del linfoma. (1)

Ventajas y Desventajas de los Transgénicos 

Ventajas

1. Los alimentos resultantes son más nutritivos, resistentes y duraderos.
2. Al ser más resistentes, se emplean menos pesticidas y herbicidas, siendo bueno para el medioambiente y la economía.
3. Son muy útiles en la creación de nuevos tipos de medicamentos y tratamientos para algunas enfermedades como el cáncer
4. Mejoran la investigación básica, ya que facilitan un mayor entendimiento de los mecanismos de funcionamiento y control de los genes. 
5. Donación de órganos y tejidos. Además, facilitan la obtención de células madre para las terapias celulares regenerativas.

Desventajas 

1. Hongos y virus pueden mutar hacia especies desconocidas para autoprotegerse.
2. Los efectos negativos en la salud son evidenciados en el largo plazo. Como el posible desarrollo de patologías tales como: alergias, intolerancias y enfermedades autoinmunes
3. Ponen en peligro la biodiversidad porque se eliminan organismos de la naturaleza.
4. El cruce de genes puede provocar la resistencia de las bacterias a antibióticos.
5. Contaminación del medio ambiente.

Referencias: 

1. https://sci-hub.se/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30975981/

2. https://repositorio.urp.edu.pe/bitstream/handle/urp/1130/TESIS-Ra%C3%BAl%20Mart%C3%ADn%20Vidal%20Coronado.pdf?sequence=1&isAllowed=y 

Ejemplo de ADN recombinante artificial en la enfermedad y un ejemplo de Recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

ADN recombinante artificial del Linfoma 

T: Los efectos de la expresión del gen DLEU1 en el linfoma de Burkitt (BL): mecanismo potencial de resistencia a la quimioinmunoterapia en BL

O: Investigar más a fondo la posible conexión entre DLEU1 y las vías de señalización BCR, y el papel de esta relación en BL.

G: DLEU1

ER: Fok I 

EL: Enzima E3

V: pEGFP-N3

CR: Células Raji

MTG: Transfección

MIC: Cultivo, qRT-PCR, secuenciación 

 Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

La conjugación bacteriana o sexo bacteriano es un proceso de transferencia génica desde una célula donadora a otra receptora, la transferencia de genes es horizontal y de forma directa donde intervienen estructural superficiales (pilus sexuales), por medio de los cuales es transferida la información genética, después de hacer contacto con receptores específicos de la pared celular de la bacteria receptora. 

Referencias

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5438612/ 

2.https://www.researchgate.net/publication/332523550_CONJUGACION_BACTERIANA_Y_RESISTENCIA_A_ANTIBIOTICOS

     

Técnica de secuenciación del Linfoma Folicular

La técnica de secuenciación de nueva generación (NGS) permite conocer el perfil mutacional del LF, o la identificación de nuevos genes recurrentemente mutados que participan en la biología de la enfermedad en donde podemos identificar la t(14;18), la hipermutación en el gen BCL2, genes codificantes de factores de transcripción (STAT6, POU2F2), genes involucrados en modulación de la respuesta inmune (TNFRSF14) y genes implicados en el desarrollo de la célula B (EBF1) entre otros, además de las lesiones clásicas en genes involucrados en regulación epigenética como CREBBP, EP300, EZH2 y KMT2D.

Referencias

1. https://www.news-medical.net/news/20191209/Next-generation-sequencing-can-detect-genetic-alterations-specific-to-follicular-lymphoma.aspx

2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6245973/ 

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en el Linfoma Folicular

La prueba de PCR más efectiva en el diagnóstico del linfoma folicular es la, ddPCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa digital de gotitas) en la cual se analiza el reordenamiento de la cadena pesada IgH y el reordenamiento bcl-2/IgH asociado con la translocación cromosómica de t(14;18). La prueba proporciona una cuantificación absoluta de las moléculas de ADN diana, además  proporciona con gran exactitud y precisión la cuantificación de la carga tumoral  por la sobreexpresión de la oncoproteína Bcl-2 que esta implicada en los mecanismos de control de la apoptosis y la prolongación de supervivencia de las células linfoides.

Referencias

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28419517/

Alteraciones en la Epigenómica

 Alteraciones en la epigenómica del Linfoma folicular

Se ha identificado mutaciones de genes asociados con la modificación de la cromatina (EZH2) e histonas metiltransferasas (MLL2, CREBBP). La inactivación del gen MLL2 indica cambios iniciales en el epigenoma al haber una combinación con la desregulación de la expresión de BLC2 esto facilitan la transformación maligna del centro germinal  en cambio las mutaciones de CREBBP actúan atenuando la acetilación de BLC6 al haber un incremento en la actividad del oncogén alterando la expresión de los genes diana de BLC6.

Referencias:

1. https://repositorio.uam.es/bitstream/handle/10486/678953/mendez_garcia_miriam.pdf?sequence=1

Alteración en la traducción

Alteración en la Traducción del Linfoma Folicular

En la traducción del linfoma folicular se ve alterada la vía PI3K/AKT la cual causa una perdida o una menor expresión del gen supresor de tumores PTEN por lo que su activación causa complicaciones haciendo que los tumores se vuelvan resistentes , además esta vía va promoviendo la supervivencia celular, la proliferación, la adaptación al estrés y las metástasis del linfoma sin control alguno. 

 Bibliografía

1. https://www.clinical-lymphoma-myeloma-leukemia.com/article/S2152-2650(20)30509-7/fulltext